IMVIC
El imvic está formado por cuatro pruebas bioquimicas ( rojo de metilo, voges-proskauer, indol y citratos) se utiliza fundamentalmente para la identificación de las enterobacterias. En estas pruebas utilizemos E-coli.
INDOL
La triptofanasa es una enzima que degrada el triptófano; en esta degradación se libera indol. Para poder localizarlo añadimos el reactivo de kovac.
Materiales:
-Un tubo de caldo de peptona.
-Reactivo Kovacs.
-Estufa.
-Mechero.
-Asa.
Procedimiento:
-Inocular una o dos colonias en caldo de peptona.
-Incubar durante (24-48)h a 37ºC.
-Añadir 4 gotas de reactivo de kovac.
Resultados:
-Aparece una banda de color rojo o rosa intenso: positivo.
-Medio amarillo: Negativo.
E.coli ----> Positivo
ROJO DE METILO.
Se utliza para detectar la fermentación ácida-mixta. Se acumulan acidos y baja el pH, cuyo cambio es detectado por un indicador
Materiales:
-Tubo de Clark-Lubs
- Rojo de metilo.
-Tubo de ensayo pequeño
-Asa.
Procedimiento:
-Coger una o dos colonias e inocular el tubo.
-Incubar durante (24-48)h a 37ºC.
-Añadir 5 gotas de rojo de metilo.
Resultados:
Rojo---- Positivo
Amarillo-----Negativo
E-coli---Positivo
VOGES PROSKAUER
Esta prueba se realiza para determinar la capacidad de una bacteria de fermentar glucosa por vía butanodiólica. Para detectar esta fermentación se utiliza alfa-naftol que reacciona con la acetoina, para formar un compuesto rojizo.
Materiales:
-Alfa-naftol
-KOH
-MRVP
-Asa
-Microorganismo.
-Mechero.
-Estufa.
Procedimiento:
-Suspender el inóculo en medio de cultivo MVRP por rotación.-Incubar a 37ºC durante (24-48)h.
-Añadir unas gotas de alfa-naftol y 4 gotas de KOH
Resultados:
Medio de color amarillo --> negativo
Medio de color rosado ---> positivo
E-coli ---> negativo
CITRATO
La prueba del citrato se realiza para saber si la bacteria es capaz de utilizar citrato como única fuente de carbono y compuestos amoniacales como única fuente de nitrógeno en su metabolismo.
Materiales:
-Medio citrato de Simons.
-Asa
-Mechero.
- Estufa
Procedimiento:
Realizar una siembra por agotamiento en la superficie del agar inclinado.
-Incubar 24h a 37ºC.
Resultado:
Color azul ----> citarto-positivo.
No cambia de color---> citrato-negativo.
E.coli----> Negativo
KLIGLER
Esta prueba se utiliza para la diferenciación de enterobacterias y que permite determinar:
-Si el microorganismo metaboliza glucosa y lactosa.
-Producción de gas.
-Producción de ácido sulfhídrico.
Materiales:
-Hilo.
-Agar hierro kligler
-Estufa.
-Mechero.
Procedimiento:
-Sembrar el medio de cultivo, picando el fondo y extendiendo sobre la superficie del medio.
-Incubar a 37ºC durante 24h.
Resultados:
Pico rojo/ fondo amarillo: la bacteria solamente fermenta la lactosa.
Pico amarillo/ fondo amarillo: la bacteria fermenta glucosa y lactosa.
Pico rojo/ fondo rojo: la bacteria no fermenta azúcares.
Presencia de burbujas o ruptura del medio: la bacteria produce gas.
Ennegrecido : la bacteria produce ácido sulfhídrico.
E-coli: Glucosa-amarillo
Lactosa-amarillo
SH2-no ennegrecido
No produce gas
Fenilalanina desaminasa.
La fenilalanina desaminasa es una enzima que desamina la fenilalanina, produciendo ácido fenilpirúvico.
Se le añade cloruro ferrico al 10%, actúa como agente quelante del ácido fenilpirúvico, formando un complejo de color verde.
Materiales:
-Medio de fenilalanina agar.
-Hilo de siembra.
-Estufa.
-Mechero
-FeCl3
Procedimiento:
-Sembra por punción el medio.
-Incubar durante 24 h a 37ºC en anaerobiosis.
-Añadir unas gotas de una solución acuosa de FeCl3
Resultados:
Color verde ---- Desaminasa-positivo.
Sin cambio de color---- Desaminasa negativo.
E-coli ---negativo
UREA
La ureasa es una enzima que degrada la urea. En esta degradación se libera amoniaco, que alcaliniza el medio. Para detectar la reacción se usa un indicador de pH que vira a rosa intenso cuando el pH aumenta.
Materiales:
-Agar urea de Christensen en tubo inclinado.
-Asa.
-Mechero.
-Estufa.
Procedimiento:
-Inocular una o dos colonias en el medio de agar.
-Incubar a 37ºC durante 48 horas.
Resultados:
Color rosado-- positivo.
Sin cambio de color---negativo
Proteus----positivo
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