En la prueba de la oxidasa actúa una enzima denominada citocromooxidasa, esta enzima se encarga de oxidar la fenilendiamina y forma el indofenol, que es un compuesto de color violeta.
Materiales:
-Papel de filtro.
-Fenilendiamina.
-Asa.
-Un medio de cultivo joven ( E-coli)
-Mechero.
Procedimiento:
-Depositar sobre el papel de filtro una colonia joven y fenilendiamina.
Resultados:
Aparición de un color azul-violeta ---> oxidasa positivo.
Aparición de un color rosado o no hay ningún cambio de color ---> oxidasa negeativo.
Como podemos observar en la imagen, nuestra bacteria es oxidasa (+).
ONPG
La prueba de ONPG permite saber si la bacteria es capaz de fermentar la lactosa. Se observa si la bacteria sintetiza la enzima beta-galactosidasa que hidroliza la lactosa para formar galactosa y glulcosa.
La prueba se basa en poner en contacto la colonia con el compuesto ONPG (ortonitrofenil-beta-D-galactopiranósido) que es muy parecido estructuralmente a la lactosa.
Materiales:
-Microorganismo: Proteus.
-Disco de ONPG.
-Suspensión de una o dos colonias.
-Estufa.
-Alcohol.
-Pinzas de metal
-Mechero.
Procedimiento:
-Preparamos una suspensión de suero fisiologico esteril con una o dos colonias.
-Introducimos un disco de ONPG con las pinzas ( previamente mojadas con alcohol y las pasamos por el mechero).
-Incubar durante 4 horas a 37ºC.
Resultado:
Medio de color amarillo ---> beta-galactosidasa positiva.
Medio incoloro o amarillo muy pálido ------> betagalactosidasa negativa ( se incuba otras 24 horas y se repite la lectura).
En nuestro caso, con colonias de Proteus nos salió negativo.
Fermentación de azúcares:
Las bacterias anaerobias y anaerobias facultativas fermentan los carbohidratos produciendo ácido y gas los cuales son detectados mediante un indicador de pH y la campana de Durham.
Material:
-Campana de Durham.
-Asa de siembra.
-Tubo liquido con caldo de peptona con indicador de pH.
-Microorganismo: E-coli
-Carbohidrato:
Procedimiento:
-En el medio de cultivo con la campana de Durham , introducimos varias colonias del microorganismo y lo incubamos a 37ºC durante 24 horas.
Resultado:
Como podemos observar nuestros tubos se quedaron naranjas tenian que haber cambiado a amarillo por que E.coli fermenta la glucosa.
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