Realizar las siguientes pruebas bioquímicas para identificar las características metabólicas de la bacteria ( en nuestro caso S.aureus). Para llevar a cabo este tipo de pruebas es necesario realizar previamente el aislamiento y cultivo de la bacteria para obtener un cultivo puro y fresco.
Fundamento teórico:
-Catalasa:
La catalasa hidroliza el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno gaseoso, que se libera formando burbujas.
Materiales:
-Portaobjetos.
-Asa.
-Cultivo joven
-Peróxido de hidrógeno.
Procedimiento:
-En un porta depositamos una colonia y añadimos una gota de peróxido de hidrógeno.
Resultados:
Si se produce burbujas --->catalasa positiva.
Si no se produce burbujas ---> catalasa negativo.
En nuestro caso nos salió como el caso B
-Oxidación - Fermentación.
Mediante esta prueba se valora si la bacteria tiene un metabolismo oxidativo o fermentativo.
En la vía de la fermentación se produce un cambio en el pH, para que dicho cambio sea visible el medio incorpora un indicador de pH. El indicador vira de verde a amarillo si aumenta la acidez.
Materiales:
- Dos tubos con medio Hugh-Leifson.
-Vaselina.
-Estufa.
-Hilo de siembra.
-Mechero.
Procedimiento:
-Sembramos por picadura ( previamente esterilizada) dos tubos de Hugh-Leifson, uno lo cubrimos con vaselina y al otro no.
-Incubar durante (24-48)h a 37ºC.
Resultados:
Tubo sin vaselina amarillo y tubo cubierto verde ----> Aerobia estricta.
-Ambos tubos amarillos---> Aerobia facultativa.
-Tubo sin cubrir verde y tubo cubierto amarillo ----> Anaerobia estricta.
En nuestro caso nos salió los dos verdes pero era porque utilizemos un cultivo que era joven ya que al hacerle una prueba catalasa salió negativa cuando el S. aureus es positivo.
El S.aureus es anaerobio facultativo.
Coagulasa:
La coagulasa es una enzima capaz de desnaturalizar la fibrina del plasma. La coagulasa nos permite identificar en el laboratorio los diferentes tipos de staphilococcus, siendo en el S.aureus positiva.
Materiales:
-Tubo con plasma.
-Asa.
-Cultivo fresco.
-Estufa.
Procedimiento:
-Se añade una suspensión densa de bacterias a un tubo pequeño con plasma y se incuba a 37ºC. Se observa entre (6-24)h.
Resultados:
Si sale positivo se observara la coagulación del suero.
Si sale negativa el plasma seguira siendo líquido.
En nuestro caso nos salió (+).
D-nasa
La Dnasa es una enzima que cataliza la rotura de los enlaces fosfodiester en el ADN. Esta prueba se utiliza principalmente para la identificación de staphylococcus, ya que las bacterias de este género producen grandes cantidades de ADNasa extracelular.
Materiales:
-Placa de medio agar ADNasa.
-Estufa
-Acido clorhidrico 1N.
-Azul de toluidina
-Microorganismo: S. aureus y S.epidermidis
Procedimiento:
-Inocular una placa de medio agar Dnasa con los dos microorganismos.
-Incubar en la estufa a 37ºC durante (24-48)h.
Resultados:
-Si se observa un halo transparente alrededor de la zona inoculada es ADNasa positivo.
-Si se observa que el medio está opaco ADNasa negativo.
En nuestro caso observamos un halo transparente, por lo que podemos concluir que S.aures es ADNasa positivo y el S.epidermidis es negativo.
Bilis esculina
Con este medio utilizemos streptococcos.
Este medio se utiliza para la identificación presuntiva de streptococos del grupo D. El agar contiene esculina, que en presencia de iones hierro forma un compuesto cuyo color va de verde olivo hasta negro. Las sales biliares que contiene inhibe el desarollo de la flora acompañante.
Materiales:
-Tubo bilis esculina.
-Asa.
-Estufa.
-Mechero.
Procedimiento:
-Inocular el tubo, con una asa ( previamente esterilizada) con un cultivo joven.
-Incubar durante tres días a 37ºC en anaerobiosis.
Resultados:
Ennegricimiento del medio :positivo.
Ausencia de oscurecimiento: Negativo.
Nosotras al utilizar streptococos la prueba nos salió positivo.
Sensibilidad a la optoquina:
La optoquina a muy baja concentración inhibe el crecimiento de Steptococcus pneumoniae, mientras que no afecta al crecimiento de los Streptococcus alfa-hemoliticos. Por tanto, esta prueba permite saber si una colonia de Streptococcus es del género S.pneumaniae
Materiales:
-Placa de agar sangre de carnero 5%.
-Disco de optoquina.
-Estufa.
Procedimiento:
En la placa de agar de sangre de carnero (5%) , sembramos S.Pyogenes por toda la placa con la ayuda de un asa ( previamente esterilizada) y en el centro con la ayuda de unas pinzas ( previamente esterilizadas) ponemos un disco con optoquina.
Resultados:
Negativo: La bacteria es resistentea la sustancia.
Positivo: La bacteria es sensible a la sustancia.
Nuestro S. aureus es resistente
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